ELISA試劑盒揭示蛋白質(zhì)純化與結(jié)晶的培養(yǎng)原理

     獲得蛋白質(zhì)的晶體結(jié)構(gòu)的*個(gè)瓶頸，就是制備大量純化的蛋白質(zhì)（>10mg），其濃度通常在10mg/ml以上，并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行結(jié)晶條件的篩選。運(yùn)用重組基因的技術(shù)，將特定基因以選殖（clone）的方式嵌入表現(xiàn)載體內(nèi)，此一載體通常具有易于調(diào)控的特性。之后再將帶有特定基因的載體送入可快速生長(zhǎng)的菌體中，如大腸桿菌，在菌體快速生長(zhǎng)的同時(shí)，也大量表現(xiàn)載體上的基因所解譯出之蛋白質(zhì)。一般而言純度越高的蛋白質(zhì)比較有機(jī)會(huì)形成晶體，因此純化蛋白質(zhì)的步驟就成為一個(gè)重要的決定因素。

    在取得高純度的蛋白質(zhì)溶液后，接下來(lái)就是晶體的培養(yǎng)。蛋白質(zhì)晶體與其他化合物晶體的形成類似，是在飽和溶液中慢慢產(chǎn)生的，每一種蛋白質(zhì)養(yǎng)晶的條件皆有所差異，影響晶體形成的變量很多，包含化學(xué)上的變量，如酸堿度、沉淀劑種類、離子濃度、蛋白質(zhì)濃度等；物理上的變數(shù)，如溶液達(dá)成過(guò)飽和狀態(tài)的速率、溫度等；及生化上的變數(shù)，如蛋白質(zhì)所需的金屬離子或抑制劑、蛋白質(zhì)的聚合狀態(tài)、等電點(diǎn)等，皆是養(yǎng)晶時(shí)的測(cè)試條件。截至目前為止，并無(wú)一套理論可以預(yù)測(cè)結(jié)晶的條件，所以必須不斷測(cè)試各種養(yǎng)晶溶液的組合后，才可能得到一顆的單一晶體。

    蛋白質(zhì)晶體的培養(yǎng)，通常是利用氣相擴(kuò)散法（Vapor Diffusion 
Method）的原理來(lái)達(dá)成；也就是將含有高濃度的蛋白質(zhì)（10～50mg/ml）溶液加入適當(dāng)?shù)娜軇?，慢慢降低蛋白質(zhì)的溶解度，使其接近自發(fā)性的沈淀狀態(tài)時(shí)，蛋白質(zhì)分子將在整齊的堆棧下形成晶體。舉例來(lái)說(shuō)，我們將蛋白質(zhì)溶于低濃度（~1.0M）的硫酸銨溶液中，將它放置于一密閉含有高濃度（~2.0M）硫酸銨溶液的容器中，由氣相平衡，可以緩慢提高蛋白質(zhì)溶液中硫酸銨的濃度，進(jìn)而達(dá)成結(jié)晶的目的。

    蛋白質(zhì)晶體在外觀上與其他晶體并無(wú)明顯不同之處，但在晶體的內(nèi)部，卻有很大的差異。一般而言，蛋白質(zhì)晶體除了蛋白質(zhì)分子外，其他的空間則充滿約40%至60%之間的水溶液，其液態(tài)的成分不僅使晶體易碎，也容易使蛋白質(zhì)分子在晶格排列上有不規(guī)則的情形出現(xiàn)，造成晶體處理時(shí)的困難及繞射數(shù)據(jù)上的搜集不易等缺點(diǎn)。但也由于高含水量的特性，讓蛋白質(zhì)分子在晶體內(nèi)與水溶液中的狀態(tài)，極為相似。所以由晶體所解出的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，基本上可視為自然狀態(tài)下的結(jié)構(gòu)。

250克    Bile Esculin Azide Agar    膽鹽七葉苷疊氮鈉瓊脂    用于腸球菌的快速選擇性分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
250克    M-Enerococcus Agar    M-腸球菌瓊脂    用于濾膜法或直接平板法，從自來(lái)水、食品或其他標(biāo)本中分離腸球菌
250克    BPW    緩沖蛋白胨水增菌液    沙門氏菌前增菌培養(yǎng)和李氏菌前增菌培養(yǎng)
250克    TSYEB    胰酶大豆酵母浸膏肉湯    用于單核細(xì)胞和李斯特菌增菌培養(yǎng)
250克    TSYEA    胰酶大豆酵母浸膏瓊脂    用于單核細(xì)胞和李斯特氏菌的分離培養(yǎng)
250克    Listeria Enrichment Broth Base    李氏菌增菌肉湯(LB1，LB2)基礎(chǔ)    李氏菌二步增菌
250克    PALCAM Agar    PALCAM瓊脂    單增李氏菌的選擇性分離
250克    Oxford Agar Base    OXA基礎(chǔ)    單增李氏菌的選擇性分離
250克    LPM Agar    李氏LPM瓊脂    單增李氏菌的選擇性分離
250克    Half Fraser Medium    Half Fraser培養(yǎng)基    李氏菌的增菌培養(yǎng)
250克    Motility Test Medium(Semisolid)    SIM培養(yǎng)基    李氏菌動(dòng)力觀察，H抗原位相變異試驗(yàn)；硫化氫、動(dòng)力、吲哚試驗(yàn)
250克    Modified Mcbride Agar Base    改良McBride瓊脂培養(yǎng)基    單增李氏菌選擇性分離
250克    Fraser Medium    Fraser培養(yǎng)基    李氏菌的增菌培養(yǎng)
250克    MBPW    改良緩沖蛋白胨水    李氏菌的增殖
250克    Citrate Agar    檸檬酸鹽培養(yǎng)基    大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別
250克    Urease Agar Base    尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)    細(xì)菌脲酶檢測(cè)，腸桿菌鑒別
100克    Potassium Cyanide Medium Base    KCN培養(yǎng)基基礎(chǔ)    用于鑒別腸道細(xì)菌KCN抑制試驗(yàn)
250克    MR VP Broth    MR-VP試驗(yàn)用培養(yǎng)基    腸桿菌科細(xì)菌的甲基紅和VP試驗(yàn)