生物試劑分析傳代培養(yǎng)細(xì)胞染色體顯示法

1．培養(yǎng)細(xì)胞：取處于指數(shù)生長期、用較大瓶皿培養(yǎng)的、80％～90％匯合單層培養(yǎng)細(xì)胞。

2．加秋水仙素：使用zui終濃度為0.02～0.8微克/毫升營養(yǎng)液，溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6～10小時(shí)；或用低溫封閉法：把培養(yǎng)細(xì)胞置于4℃條件下6～12小時(shí)后，再于37℃溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6～10小時(shí)處理（加秋水仙素）。

3．采集分裂細(xì)胞：可利用分裂中期細(xì)胞體變圓與底物附著不牢特點(diǎn)，此時(shí)手持培養(yǎng)瓶，左右反復(fù)橫向水平搖動(dòng)，令培養(yǎng)液在培養(yǎng)細(xì)胞表面反復(fù)沖刷。應(yīng)用此法可使90％的中期分裂細(xì)胞從瓶壁脫落，注意勿用力過猛，以防多量非分裂細(xì)胞脫落影響觀察。

4．離心：收集培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5～10分鐘。

5．低滲處理：吸除上清液、加入預(yù)溫至37℃的0.075M KCl溶液，在溫箱中靜置20～30分鐘。

6．預(yù)固定：向懸液中加新鮮1：3醋酸、甲醇固定液1ml，用吸管吹打調(diào)勻，此措施能起到先使細(xì)胞表面輕微固定，可防止固定后細(xì)胞粘連成塊。

7．固定：離心，同4，吸除上清液，加新鮮固定劑5～10ml；加固定劑時(shí)要用一手微斜持離心管，另手用吸管吸取固定劑，把固定劑逐滴滴在離心管壁上，使之慢慢流入離心管中，然后輕輕吹打均勻，置15～20分鐘。

8．重復(fù)7，末次離心后，小心吸除大部分上清，據(jù)懸液中細(xì)胞密度大小，余下固定液0.5～1ml。

9．制片：用滴片法制片，按如下步驟：*洗凈載物片，勿留任何油脂，置冰箱中儲(chǔ)備備用。滴片前現(xiàn)從冰箱中取出冷載物片1片，在載物片表面出現(xiàn)細(xì)微水氣時(shí)，立即向片的一側(cè)滴2～3滴細(xì)胞懸液，滴片時(shí)的距離能保持半米高度才好。滴片后置室溫中令其自然干燥，或用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹干亦可。如此制備好的標(biāo)本可置盒中備用或立即進(jìn)行染色觀察。

10.染色和封片：一般常用Giemsa染色：取干液Giemsa 1份加pH6.8磷酸緩沖液9份混合，染色10分鐘后，水洗、晾干、可直接觀察。如標(biāo)本需要保存或做長時(shí)間觀察，可過二甲苯兩次后，用中性樹膠封片后，再過二甲苯，然后封片亦可。

553-24-2    3-butylpyridine    N-甲基野靛堿    
553-21-9    539-44-6    (1R)-1,2,3,4,5,6-hexahydro-1,5-methano-8H-pyrido[1,2-a][1,5]...    
553-17-3    對(duì)甲基苯肼    486-87-3    
553-12-8    p-tolylhydrazine    α-萘乙酸鈉    
553-03-7    539-47-9    (+)-alpha-isolupanine    
552-94-3    3-(2-呋喃基)丙烯酸    487-06-9    
552-89-6    Furylacrylic acid    5,7-二甲氧基香豆素    
552-86-3    539-48-0    5,7-Dimethoxycoumarin    
552846-17-0    對(duì)苯二甲胺    487-21-8    
552-82-9    alpha,alpha'-diamino-P-xylene    2,4-二氧四氫喋啶    
552-58-9    539-74-2    Lumazine    
552-45-4    3-溴丙酸乙酯    507-28-8    
552-41-0    Ethyl 3-bromopropionate    四苯基氯化砷鎓水合物    
552-38-5    539-82-2    Tetraphenylarsonium chloride    
552331-16-5    戊酸乙酯    507-52-8    
552-32-9    Ethyl n-Valerate    2-三氟甲基-2-丙醇    
552-30-7    539-86-6    1,1,1-trifluoro-2-methylpropan-2-ol    
552-22-7    二烯丙基二硫    507-70-0    
552-16-9    Allicin    龍腦    
551-93-9    539-88-8    ((1S)-endo)-(-)-borneol    
551-92-8    乙酰丙酸乙酯    508-02-1    
551-62-2    Ethyl levulinate    齊墩果酸    
551-16-6    539-90-2    oleanolic acid    
551-15-5    丁酸異丁酯    508-75-8    
551-11-1    isobutyl butyrate    鈴蘭毒甙    
551-06-4    540-07-8    convallatoxin    
550-99-2    己酸戊酯    509-15-9    
550-74-3    amyl caproate    鉤吻堿    
550-44-7    540-09-0    gelsemine free base    
550378-78-4    12-二十三酮    509-34-2    
550378-39-7    tricosan-12-one    溶劑紅 49    
550378-07-9    540-10-3    3',6'-bis(diethylamino)spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xant...    
550363-85-4    鯨蠟    510-15-6    
550347-54-1    hexadecyl palmitate    乙酯殺螨醇    
549-49-5    540-18-1    Chlorobenzilate    
549-18-8    丁酸戊酯    511-08-0    
548-93-6    amyl butyrate    麥角克堿    
548-83-4    540-23-8    ergocristine    
548-80-1    對(duì)甲苯胺,鹽酸鹽    511-45-5    
548-73-2    p-Toluidine Hydrochloride    二苯哌丙醇