細(xì)胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法及分析色譜技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法：

    (1) 、細(xì)胞培養(yǎng)基試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。

　　(2) 、棄掉培養(yǎng)基皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。

　　(3) 、用Tip頭加入1ml Trypsin液，消化1分鐘（37。C，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞*從壁上脫落下來為止。

　　(4) 、加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

　　(5) 、用Tip頭多次吹吸，使細(xì)胞*分散開。

　　(6) 、將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm離心5min。

　　(7) 、用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個細(xì)胞加入一個35mm培養(yǎng)皿。

　　(8) 、將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

　　(9) 、將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。 

    細(xì)胞培養(yǎng)基分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們在分析色譜上取得了良好的分離效果時，可以將其放大，應(yīng)用到制備色譜上，由此，我們需要考慮調(diào)整上樣量，流速，梯度。

　　1、上樣量的調(diào)整：他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內(nèi)徑有關(guān)：

　　具體關(guān)系時;制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備豬場/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。

　　2、流速的調(diào)整：

　　制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。

　　3、梯度的調(diào)整：

　　制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速。